第423章成功(3/3)
报告基因相比,线性范围较窄,灵敏性较低。
β半乳糖苷酶:β半乳糖苷酶由大肠杆cz基因编码。可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达,是最常用的监测转染率的报道基因之一。以邻-硝基苯-β-d-半乳吡喃糖苷(ong)为底物可用标准的比色法检测酶活性,其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红-β-d-半乳吡喃糖苷(crg)是另一个可用比色法检测酶活性的底物,其灵敏度比ong高近10倍。以mug和荧光素二半乳糖苷(fdg)为底物则可用荧光法检测其活性。此法可检测单个细胞的酶活性,并可用于流式细胞学(facs)分析。如以二氧杂环丁烷为底物,可用化学发光法检测酶活性,其检测动力学范围最大,灵敏度最高,与用生物发光法检测荧光素酶活性的灵敏度相似。
荧光素酶是能够催化不同底物氧化发光的一类酶。哺乳细胞无内源性荧光素酶。最常用的荧光素酶有细菌荧光素酶、萤火虫荧光素酶和reni荧光素酶。细菌荧光素酶对热敏感,因此在哺乳细胞的应用中受到限制。萤火虫荧光素酶灵敏度高。检测线性范围宽达7~8个数量级,是最常用于哺乳细胞的报道基因。用荧光比色计即可检测酶活性,因而适用于高通量筛选。随着具有膜通透性和光裂解作用的萤火虫荧光素酶的应用,无需裂解细胞即可检测酶活性。reni荧光素酶催化肠腔素氧化,产物可透过生物膜,可能是最适用于活细胞的报告分子。将荧光素酶报告基因载体转染到细胞中,可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。自1986年起,萤火虫荧光素酶基因被用作测定基因表达的报告基因,获得了广泛的应用ga公司的gl3及gl2系列载体,含sv40启动子及增强子的不同组合,有助于分析dna片段的转录活性。
“主人,成功了!”
不知道过了多久,墨莲人恭敬地对李安道。
李安满意地看着自己的身体,然后进入了这个躯体之中!()
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